MagVigen™ – Poly T mRNA Select

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mag vigen mRNA選擇納米顆粒是信使RNA純化的理想選擇。mag vigen mRNA選擇納米顆粒可從總RNA中高效回收聚腺苷酸尾信使RNA。短時間孵育后，mRNA被MagVigen mRNA選擇納米顆粒捕獲。產(chǎn)生的納米顆粒-聚(A) mRNA復合物可以用磁鐵從樣品的其余部分中分離出來。保留的mRNA材料可以從納米顆粒上切割下來，用于產(chǎn)生測序文庫。

mag vigen mRNA選擇納米顆粒能夠從總RNA中純化poly(A) mRNA。它們可用于逆轉(zhuǎn)錄、RNA探針和RNA文庫構(gòu)建。純化的mRNA產(chǎn)物可以通過凝膠電泳、PCR定量和測序進一步分析。

產(chǎn)品內(nèi)容

:

• cat # 61004:MagVigen mRNA選擇納米顆粒

3毫升，1毫克/毫升，結(jié)合能力高達10-20微克mRNA，或高達300皮摩爾熒光團標記的聚A26 每毫升。

Cat# K61004還包括:

• 成塊緩沖區(qū)
• 結(jié)合緩沖液
• 洗滌緩沖液
• 洗脫緩沖液

所有材料應(yīng)儲存在4°c下。

保質(zhì)期:6個月

所需材料

• 去離子水。

注意:

有效捕獲mRNA所需的納米顆粒的量取決于起始材料中多聚(A)尾mRNA的濃度。

通常，每100μg總RNA使用100μl MagVigen mRNA選擇納米顆粒。

重要提示:使用前一定要重新懸浮納米顆粒。

mRNA捕獲協(xié)議

結(jié)合mRNA

1. 從儲存中取出MagVigen mRNA選擇納米顆粒，并將其置于室溫。




2. 使用前，渦旋MagVigen DNA Select納米顆粒10秒鐘。

注意: 確保珠子全重新懸浮并充分分散。

3. 取出100μl MagVigen mRNA選擇納米顆粒，放入干凈的1.5ml微量離心管中。




4. 使用磁性架收集mag vigen mRNA選擇納米顆粒，棄去上清液。

注意: 在微量離心管的側(cè)面應(yīng)該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉淀物。

5. 將納米顆粒重新懸浮在200μl封閉緩沖液中，并在室溫下孵育10分鐘。




6. 使用磁性架收集mag vigen mRNA選擇納米顆粒，棄去上清液。




7. 將納米顆粒重新懸浮在200μl結(jié)合緩沖液中。




8. 向mag vigen mRNA選擇納米顆粒中添加RNA樣品。




9. 渦旋或吸取反應(yīng)溶液，以充分混合。

注意: 在捕獲反應(yīng)期間不引入氣泡是理想的。

10. 在室溫下孵育MagVigen mRNA選擇納米顆粒-RNA反應(yīng)30分鐘。




11. 孵育后，使用磁鐵架從溶液中分離捕獲mRNA的納米顆粒。




12. 用移液管小心移去上清液，確保不要干擾捕獲mRNA的納米顆粒沉淀。

洗滌mRNA

13. 將納米顆粒重新懸浮在200μl洗滌緩沖液中，并在室溫下放置2分鐘。




14. 使用磁鐵架將捕獲mRNA的納米顆粒從洗滌液中分離出來。小心取出并丟棄上清液。。




15. 重復步驟13-14，總共進行兩次清洗。

洗脫mRNA

16. 通過添加20μl洗脫緩沖液，從納米顆粒中洗脫捕獲的mRNA。

注意: 可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)洗脫緩沖液的體積。

17. 輕輕吸移至混合均勻，并在室溫下孵育5分鐘。

注意: 理想的是在洗脫反應(yīng)過程中不引入氣泡。

18. 旋轉(zhuǎn)幾秒鐘以收集溶液。




19. 將試管放在磁性架上1分鐘，以將納米顆粒與洗脫的mRNA分離。




20. 將含有mRNA產(chǎn)物的上清液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中。確保不要弄亂顆粒。純化的mRNA現(xiàn)在準備用于隨后的評估。

MagVigen™ – Poly T mRNA Select